・２６・ 微生物学免疫学进展２０１５年１２月第４３卷第６期Ｐｒｏｇ ｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ ＩｍｍｕｎｏｌＤｅｃ ２０１５，Ｖｏ１．４３ Ｎ０．６ ，・论著・ 丙型肝炎病毒不同标志物检测结果的相关性分析 谷金莲，于洋，梁争论 中国食品药品检定研究院，北京１０００５０ 摘要：目的分析丙型肝炎病毒（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ ｖｉｒｕｓ，ＨＣＶ）抗原、抗体及核酸标志物实验室检测结果之间的关联性，评 用ＨＣＶ ＲＮＡ定量试剂、ＨＣＶ核心 价适合血源筛查与早期临床确诊联合检测ＨＣＶ感染的实验室诊断技术。方法性样本进行基因分型。结果抗原试剂及ＨＣＶ抗体试剂分别检测３０４份血浆样本中ＨＣＶ ＲＮＡ载量、ＨＣＶ Ａｇ和抗一ＨＣＶ指标，并对ＨＣＶ ＲＮＡ阳 在３０４份血浆样本中，检出ＨＣＶ ＲＮＡ阳性样本８７份，其ＨＣＶ ＲＮＡ载量≥５００ ＩＵ／ ｍＬ、５００—３０ ＩＵ／ｍＬ之间和＜３０ ＩＵ／ｍＬ时，血清学标志物ＨＣＶ Ａｇ浓度≥３ ｆｍｏｌ／Ｌ及抗一ＨＣＶ信号值／判断值≥ｌ的 阳性率分别为９２．０％（２３／２５）：９６．０％（２４／２５）、５８．８％（１０／１７）：８２．３％（１４／１７）及１１．１％（５／４５）：７５．６％（３４／４５）． ＨＣＶ ＲＮＡ载量低于基因分型试剂盒ＬＯＤ要求为５００ ＩＵ／ｍＬ时，基因分型检测率为２４．２％（１５／６２）。ＨＣＶ ＲＮＡ阴 性样本２１７份中，ＨＣＶ Ａｇ浓度≥３ ｆｍｏＬ／Ｌ和抗一ＨＣＶ信号值／判断值≥１的样本阳性率分别为３．２％（７／２１７）和 ３２．７％（７１／２１７）。血清学指标在不同ＨＣＶ ＲＮＡ载量的阳性率差异具有统计学意义（ ＝ｌ９７．４，Ｐ＜０．０１），ＨＣＶ ＲＮＡ载量与ＨＣＶ Ａｇ和抗一ＨＣＶ水平成正相关。结论因分型检测能力需要进一步提高。 关键词：丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）；血清学标志物；试剂 在中国人群中存在低ＨＣＶ ＲＮＡ水平携带者，ＨＣＶ Ａｇ和基 中图分类号：Ｒ３７３．２ １ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００５—５６７３（２０１５）０６—００２６—０４ ＤｏＩ：１０．１３３０９／ｉ．ｃｎｋｉ．ｐｍｉ．２０１５．０６．００７ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｒｅｓｕｌｔｓ ｆｏｒ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ ｖｉｒｕｓ ｍａｒｋｅｒｓ ＧＵ Ｊｉｎ—ｌｉａｎ，ＹＵ Ｙａｎｇ，ＬＩＡＮＧ Ｚｈｅｎｇ—ｌｕｎ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｆｏｒ Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｔｒｏｌ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００５０，Ｃｈｉｎａ Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：Ｌ１ＡＮＧ Ｚｈｅｎｇ—ｌｕｎ，Ｅ—ｍａｉｌ：ｌｚｈｅｎｇｌｕｎ＠１２６．ｃｏｒｎ Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ａｎａｌｙｚｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｔｏ ｔｈｅ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｒｅｓｕｌｔｓ ｆｏｒ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ ｖｉｒｕｓ（ＨＣＶ）ａｎｔｉｇｅｎ。ａｎｔｉｂｏｄ— Ｙ，ａｎｄ ＲＮＡ ｍａｒｋｅｒｓ，ａｎｄ ｅｖａｌｕａｔｅ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｂｌｏｏｄ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ａｎｄ ｊｏｉｎｔ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ＨＣＶ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｅａｒｌｙ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ＨＣＶ ＲＮＡ ｌｏａｄｓ，ＨＣＶ Ａｇ ａｎｄ ａｎｔｉ—ＨＣＶ ｉｎｄｅｘ ｏｆ ｐｌａｓｍａ ｓａｍｐｌｅｓ ｆｒｏｍ ３０４ ｃａｓｅｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃ— ｔｅｄ ｂｙ ＨＣＶ ＲＮＡ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｒｅａｇｅｎｔｓ，ＨＣＶ ｃｏｒｅ ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅａｇｅｎｔｓ，ａｎｄ ＨＣＶ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｒｅａｇｅｎｔｓ ｆｒｏｍ Ａｂｂｏｔｔ，ａｎｄ ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｔｙｐｉｎｇ ｏｆ ＨＣＶ ＲＮＡ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｓａｍｐｌｅｓ ｗａｓ ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ａｍｏｎｇ ｔｈｅ ３０４ ｐｌａｓｍａ ｓａｍｐｌｅｓ，８７ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ＨＣＶ ＲＮＡ ｐｏｓｉｔｉｖｅ．Ｗｈｉｌｅ ｔｈｅ ＨＣＶ ＲＮＡ ｌｏａｄｓ ｗｅｒｅ≥５００ ＩＵ／ｍＬ，ｂｅｔｗｅｅｎ ５００ ａｎｄ ３０ ＩＵ／ｍＬ，ａｎｄ＜３０ ＩＵ／ｍＬ，ｓａｍｐｌｅｓ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒａｔｅ ｏｆ ＨＣＶ Ａｇ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ≥３ ｆｍｏｌ／Ｌ ａｎｄ ａｎｔｉ—ＨＣＶ ｓｉｇｎａｌ ｖａｌｕｅ／ｊｕｄｇｍｅｎｔ ｖａｌｕｅ≥１ ｗｅｒｅ ９２．０％（２３／２５）： ９６．０％（２４／２５）；５８．８％（１０／１７）：８２．３％（１４／１７）；１１．１％（５／４５）：７５．６％（３４／４５），ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｔｙｐｉｎｇ ｒａｔｅ ｗａｓ ２４．２％（１５／６２）ｗｈｅｎ ｔｈｅ ＨＣＶ ＲＮＡ ｌｏａｄｓ ｗｅｒｅ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｅ ５００ ＩＵ／ｍＬ ＬＯＤ ｓｔａｎｄａｒｄ ｏｆ ｇｅｎｅｔｉｃ ｔｙｐｉｎｇ ｒｅａｇｅｎｔ． Ａｍｏｎｇ ｔｈｅ ２１７ ＨＣＶ ＲＮＡ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｓａｍｐｌｅｓ，ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒａｔｅ ｏｆ ＨＣＶ Ａｇ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ＞／３ ｆｍｏｌ／Ｉ ａｎｄ ａｎｔｉ—ＨＣＶ ｓｉｇｎａｌ ｖａｌ— ｕｅ／ｊｕｄｇｍｅｎｔ ｖｌｕｅ≥１ａ ｓａｍｐｌｅｓ ｗｅｒｅ ３．２％（７／２１７），３２．７％（７１／２１７），ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｆｏｒ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒａｔｅｓ ｏｆ ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｄｉｃａｔｏｒｓ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ＨＣＶ ＲＮＡ ｌｏａｄｓ ｉｓ ｓｔａｔｉｓｔｉｃｌａｌｙ ｓｉｎｉｇｉｆｃａｎｔ（ ＝１９７．４，Ｐ＜Ｏ．Ｏ１）．Ｔｈｅｒｅ ｉｓ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｒｒｅｌａ— ｔｉｏｎ ｔｏ ＨＣＶ ＲＮＡ ｌｏａｄｓ ａｎｄ ＨＣＶＡｇ．ａｎｔｉ—ＨＣＶ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅｒｅ ａｒｅ ＨＣＶ ｃａｒｒｉｅｒｓ ｗｉｔｈ ｌｏｗ ＨＣＶ ＲＮＡ １ｏａｄｓ ｉｎ ｐｏｐｕｌａ— ｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｈｉｎａ．Ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ＨＣＶＡｇ ａｎｄ ｇｅｎｅｔｉｃ ｔｙｐｉｎｇ ｎｅｅｄ ｔｏ ｂｅ ｉｍｐｒｏｖｅｄ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ ｖｉｒｓ（ＨＣＶ）；Ｓｅｒｕｏｌｏｇｉｃａｌ ｍａｒｋｅｒ；Ｒｅａｇｅｎｔ 丙型肝炎是由丙型肝炎病毒（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ ｖｉｒｕｓ， 作者简介：谷金莲，副研究员，主要从事丙型肝炎病毒诊断试剂的 研究。 ＨＣＶ）感染引起的世界性传染病之一。ＨＣＶ在中国 人群的感染率达３．２％，初发感染往往比较隐匿，仅有 约２０％～３０％的感染者呈急性肝炎表现，ＨＣＶ感染 的实验室检查是丙型肝炎诊断的重要依据，所以选择 通讯作者：梁争论，Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｚｈｅｎｇｌｕｎ＠１２６．ｅ０ｍ 微生物学免疫学进展２０１５年１２月第４３卷第６期Ｐｒｏｇ ｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ ｈｎｒｎｕｎｏｌ，Ｄｅｃ：．２０１５，Ｖｏ１．４３ Ｎｏ．６ 。２７・ 快速、灵敏、特异的ＨＣＶ检测方法十分重要 。实 验中应用Ａｂｂｏｔｔ公司系列生产的ＨＣＶ核心抗原试 剂、ＨＣＶ抗体检测试剂、ＨＣＶ ＲＮＡ定量检测试剂及 ＨＣＶ ＲＮＡ基因分型试剂，对３０４份血浆样本进行 ＨＣＶ不同标志物的检测，现将结果报道如下。 １材料与方法 １．１材料 １．１．１样本样本来自于中国广东、广西、贵州、四 川、湖南、上海、河南、陕西、河北和新疆等地血站收 集的３０４份人血浆。 １．１．２ 主要试剂及仪器ＨＣＶ ＲＮＡ定量试剂、 ＨＣＶ核心抗原试剂、ＨＣＶ抗体试剂及ＨＣＶ ＲＮＡ基 因分型试剂均购自美国Ａｂｂｏｔｔ公司；雅培全自动化 学发光免疫分析仪（型号：Ａｒｃｈｉｔｅｃｔ ｉ２０００）购自美国 Ａｂｂｏｔｔ公司；雅培自动化样本核酸提纯系统（型号： ｍ２０００ｓｐ）及实时荧光定量ＰＣＲ仪（型号：ｍ２０００ｒｔ 仪器）由北京大学医学部购买协助提供测试。 １．２ 方法 １．２．１ ＨＣＶＡｇ的检测 Ａｂｂｏｔｔ Ａｒｃｈｉｔｅｃｔ ＨＣＶ Ａｇ 试剂采用两步法免疫检测原理，一步是使用丙型肝 炎病毒单克隆抗体包被的微粒子与预处理样本中的 丙型肝炎病毒抗原相结合，经冲洗后进人第二步，加 入吖啶酯标记的丙型肝炎病毒抗体结合物，再次冲 洗后，向反应｝昆合物中加入预激发液和激发液。然 后测量化学发光反应的结果，以相对发光单位 （ＲＬＵｓ）表示。样本中的丙型肝炎病毒抗原含量和 Ａｒｃｈｉｔｅｃｔ ｉ光学系统检测到的ＲＬＵｓ值呈正向关系。 如果样本的浓度≥３．００ ｆｍｏＬ／Ｌ，则被视为丙型肝炎 病毒抗原阳性。即运用化学发光微粒子免疫检测法 （Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ ｍｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅ ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ， ＣＭＩＡ）定量检测丙型肝炎病毒抗原。 １．２．２ ＨＣＶＡｂ的检测Ａｒｃｈｉｔｅｃｔ Ａｎｔｉ—ＨＣＶ是运用 化学发光微粒子免疫检测技术，定性测定人血清和 血浆中的ＨＣＶ抗体。采用两步法免疫检测，第一 步，将样本、重组ＨＣＶ抗原包被的磁微粒子和稀释 液｝昆合。样本中的ＨＣＶ抗体与ＨＣＶ抗原包被的微 粒子结合；冲洗后进入第二步，加入吖啶酯标记的鼠 抗人抗体结合物；再次冲洗后，将预激发液和激发液 加入到反应混合物中；测量其产生的化学发光反应， 以相对发光单位（ＲＬＵｓ）表示。样本中的ＨＣＶ抗体 和Ａｒｃｈｉｔｅｃｔｉ光学系统检测到的ＲＬＵｓ值之间成正 比。通过对比反应中的化学发光信号和之前Ａｒｃｈｉ— ｔｅｃｔ丙型肝炎病毒抗体校准得出的ｃｕｔ—ｏｆｆ信号，确 定其样本中是否存在ＨＣＶ抗体。如果样本中化学 发光信号≥ｃｕｔ—ｏｆｆ值，则应考虑该样本呈ＨＣＶ抗体 反应阳性。 １．２．３ ＨＣＶ ＲＮＡ定量检测 Ａｂｂｏｔｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ ＨＣＶ测定法是应用Ａｂｂｏｔｔ ｍ２０００ｓｐ样本核酸提纯 系统以及ｍ２０００ｒｔ实时荧光定量ＰＣＲ仪，体外反转 录聚合酶链式反应（ＲＴ—ＰＣＲ）测定技术来定量检测 ＨＣＶ ＲＮＡ。目标序列选择ＨＣＶ基因组的５ 端高度 保守区使其对１、２、３、４、５和６基因型均能被检测。 由Ａｂｂｏｔｔ ｍ２０００ｒｔ检测到ＨＣＶ特异荧光信号的扩 增循环与原始样品中存在的ＨＣＶ ＲＮＡ浓度ｌｏｇ值 成正比。该试剂还根据第二次ＷＨＯ国际标准对 ＨＣＶ ＲＮＡ（ＮＩＢＳＣ代码９６／７９８）进行了标化，并且 结果以国际单位ｍＬ（ＩＵ／ｍＬ）表示。其检测的 线性范围为１２～１．０×１０ ＩＵ／ｍＬ，最低检测限为 １２ ＩＵ／ｍＬ。 １．２．４ ＨＣＶ ＲＮＡ的基因分型 Ａｂｂｏｔｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ ＨＣＶ Ｇｅｎｏｔｙｐｅ １１试剂是采用ＲＴ—ＰＣＲ的方法，使用 基因型特异荧光标记的寡核苷酸探针，设计４组 ＰＣＲ引物。其中一对引物的配对序列位于ＨＣＶ基 因组５ 端非翻译区（ＵＴＲ）。设计的该引物对用于 扩增所有ＨＣＶ隔离群。设计的第二对引物用来扩 增基因型１ａ的ＮＳ５ｂ区域。设计的第三对引物用 来扩增基因型１ｂ的ＮＳ５ｂ区域。作为对照，设计的 内控引物对则用来扩增南瓜植物，南瓜属中羟基丙 酮酸还原酶基因的一部分，将其加入以人阴性血浆 稀释并经包被的ＲＮＡ微粒中，通过三种不同的反 应，可检测ＨＣＶ基因的基因型１、２、３、４、５、６，以及 亚型１ａ和１ｂ。试剂盒的ＬＯＤ要求为５００ ＩＵ／ｍＬ。 应用以上三种雅培公司的Ａｂｂｏｔｔ ＲｅａｌＴｉｍｅ ＨＣＶ定量试剂、Ａｂｂｏｔｔ Ａｒｃｈｉｔｅｃｔ ＨＣＶ Ａｇ定量试剂 和Ａｒｃｈｉｔｅｃｔ Ａｎｔｉ－ＨＣＶ定性试剂分别对收集的３０４ 份血浆样本进行检测，其中ＨＣＶ ＲＮＡ阳性样本有 ８７份，再用Ａｂｂｏｔｔ ＲｅａｌＴｉｍｅ ＨＣＶ Ｇｅｎｏｔｙｐｅ １１试剂进 行基因分型检测。 １．３统计学分析检测结果采用ＳＰＳＳ１６．０统计学 软件进行比较分析。采用 检验对ＨＣＶ ＲＮＡ和 ＨＣＶ Ａｇ试剂检测结果进行分析，以Ｐ＜０．０５为差 异有统计学意义。 ２ 结 果 ２．１ ＨＣＶ ＲＮＡ载量与ＨＣＶ Ａｇ和ＨＣＶ Ａｂ含量的 相关性３０４份血浆样本检测中，ＨＣＶ ＲＮＡ、ＨＣＶ Ａｇ和抗一ＨＣＶ试剂分别检出阳性样本数分别为８７ ・２８・ 微生物学免疫学进展２０１５年１２月第４３卷第６期Ｐｒｏｇ ｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ，Ｄｅｃ．２０１５，Ｖｏ１．４３ Ｎ０．６ （２５＋ｌ７＋４５）、４５和１４３份，阳性检出率分别为 ２８．６％（８７／３０４）、１４．８％（４５／３０４）和４７．０％ 为５和３４份，阳性率分别为１１．１％（５／４５）和 ７５．６％（３４／４５），随着ＨＣＶ ＲＮＡ载量的升高，ＨＣＶ （１４３／３０４）。在检出的８７份ＨＣＶ ＲＮＡ阳性样本， 其ＨＣＶ ＲＮＡ载量均≥５００ ＩＵ／ｍＬ的样本２５份，且 Ａｇ和抗．ＨＣＶ阳性符合率也升高，血清学指标在不 同ＨＣＶ ＲＮＡ载量的阳性率差异具有统计学意义 （ ＝１９７．４，Ｐ＜Ｏ．Ｏ１），ＨＣＶ ＲＮＡ载量与ＨＣＶＡｇ和 抗一ＨＣＶ水平成正相关。２１７份ＨＣＶ ＲＮＡ阴性血样 ＨＣＶ Ａｇ浓度Ｉ＞３．００ ｆｍｏｌ／Ｌ和抗．ＨＣＶ信号值／判断 值≥１的阳性样本数分别为２３和２４份，阳性率分 别为９２．０％（２３／２５）和９６．０％（２４／２５）；ＨＣＶ ＲＮＡ 载量在５００～３０ ＩＵ／ｍＬ之间的样本有１７份，ＨＣＶ Ａｇ浓度Ｉ＞３．００ ｆｍｏｌ／Ｌ和抗一ＨＣＶ信号值／判断值≥ １的阳性样本数分别为１０和１４份，阳性率分别为 ５８．８％（１０／１７）和８２．３％（１４／１７）；ＨＣＶ ＲＮＡ载量 检测中，ＨＣＶ Ａｇ浓度Ｉ＞３．００ ｆｍｏｌ／Ｌ和抗一ＨＣＶ信号 值／判断值≥１的分别有７和７１份，阳性符合率占 ３．２％（７／２１７）和３２．７％（７１／２１７）。结果显示，由 于雅培公司３种试剂的检测原理不同，敏感性和特 异性均存在差异，中国人群中存在低丙型肝炎病毒 ＜３０ ＩＵ／ｍＬ的样本４５份，ＨＣＶ Ａｇ浓度Ｉ＞３．００ ｆｒｎｏｌ／ Ｌ和抗．ＨＣＶ信号值／判断值≥１的阳性样本数分别 核酸水平携带者，而ＨＣＶＡｇ在不同ＨＣＶ ＲＮＡ载量 水平的样本均有分布，结果见表１。 表１ ＨＣＶ ＲＮＡ载量与ＨＣＶ Ａｇ、ＨＣＶ Ａｂ血清学标志物相关性 Ｔａｂ．１ Ｔｈｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｔｏ ＨＣＶ ＲＮＡ ｌｏａｄｓ ａｎｄ ＨＣＶ Ａｇ，ＨＣＶ Ａｂ ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ ｍａｒｋｅｒ ２．２ ＨＣＶ ＲＮＡ载量与基因分型相关性应用Ａｂ— 份，基因分型检测率为１００％（２５／２５）；ＨＣＶ ＲＮＡ载 量在５００～３０ ＩＵ／ｍＬ之间的样本有１７份，其包含１ 型或亚型和６型的血浆样本有１２（２＋８＋２）份和１ 份，基因分型检测率为７６．５％（１３／１７）；ＨＣＶ ＲＮＡ ｂｏｔｔ ＲｅａｌＴｉｍｅ ＨＣＶ Ｇｅｎｏｔｙｐｅ Ｉ１试剂，采用ＲＴ—ＰＣＲ 的方法，对Ａｂｂｏｔｔ ＲｅａｌＴｉｍｅ ＨＣＶ定量试剂检出阳性 样本８７份进行ＨＣＶ基因分型检测，结果见表２。 其中分为４个基因型（除未检出基因４型和５型 载量＜３０ ＩＵ／ｍＬ的样本４５份中，只有２份分别为１ 型和２型被此基因分型试剂检出；当ＨＣＶ ＲＮＡ载 外），共４０份检测获得基因型别，基因分型检测率 为４５．９７％（４０／８７），包括基因１型或亚型、２、３和６ 型分别测出３３份、３份、１份和３份，这与文献［４］ 报道的中国流行最广泛的ＨＣＶ基因亚型为１ｂ及 量低于基因分型试剂盒ＬＯＤ要求的５００ ＩＵ／ｍＬ时， 还有４７（４＋４３）份样本检测未能分出基因型别，基因 分型检测率为２４．２％（１３＋２／１７＋４５）。因此ＨＣＶ ＲＮＡ基因分型试剂的检测能力需进一步提高。 ２ａ一致。ＨＣＶ ＲＮＡ载量≥５００ ＩＵ／ｍＬ的样本２５ 表２ ＨＣＶ ＲＮＡ载量与基因分型相关性分析 Ｔａｂ．２ Ｔｈｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｔｏ ＨＣＶ ＲＮＡ ｌｏａｄｓ ａｎｄ ｇｅｎｅｔｉｃ ｔｙｐｉｎｇ 注…／’表示未测定。 微生物学免疫学进展２０１５年１２月第４３卷第６期Ｐｒｏｇ ｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ，Ｄｅｃ．２０１５，Ｖｏ１．４３ Ｎｏ．６ ・２９・ ３讨论 或慢性丙型肝炎的急性恶化期，应注意区别血清学 标志物ＨＣＶ ＲＮＡ载量的变化；当抗．ＨＣＶ阳性而 ＨＣＶ ＲＮＡ阴性，则为慢性丙型肝炎或恢复期患者。 ＨＣＶ ＲＮＡ、ＨＣＶＡｇ和抗一ＨＣＶ试剂分别检测ＨＣＶ 感染不同时期收集的３０４份血浆样本中标志物 ＨＣＶ ＲＮＡ、ＨＣＶＡｇ和ＨＣＶＡｂ，因此，三种试剂阳性 丙型肝炎相关预防和诊断治疗为近年来的研究 热点。快速、准确、早期地检测ＨＣＶ感染是临床诊 断和治疗的关键＿５ Ｊ。目前临床上主要采用血清学 和分子生物学两种方法检测ＨＣＶ，血清学方法原理 是应用已知抗原或抗体检测血清、血浆中相应特异 抗体或抗原的病原学检测方法，具有敏感性和特异 检出率分别为２８．６％（８７／３０４）、１４．８％（４５／３０４） 和４７．Ｏ％（１４３／３０４）存在差异。结果表明，ＨＣＶＡｇ 和基因分型检测能力需要进一步提高，更应进一步 性高、操作简单、费用低廉、应用范围广等优点，各医 院和体检机构目前主要将其运用于初步诊断，但因 为存在抗体生成的窗口期，会造成不同程度的漏诊。 分子生物学技术是通过已知ＨＣＶ序列设计特异性 引物，ＨＣＶ ＲＮＡ检测方法具有灵敏度高、特异性强 等特点，大大地缩短了检测的“窗口期”，有助于对 ＨＣＶ感染的早期诊断 。 实验中应用Ａｂｂｏｔｔ公司生产的Ａｂｂｏｔｔ ＲｅａｌＴｉｍｅ ＨＣＶ试剂、Ａｂｂｏｔｔ Ａｒｃｈｉｔｅｃｔ ＨＣＶＡｇ试剂及Ａｒｃｈｉｔｅｃｔ Ａｎｔｉ．ＨＣＶ试剂分别检测３０４份血浆样本中ＨＣＶ ＲＮＡ载量和ＨＣＶＡｇ、抗一ＨＣＶ血清学标志物，在检 出的８７份ＨＣＶ ＲＮＡ阳性样本中，ＨＣＶ ＲＮＡ载量 均≥５００ ＩＵ／ｍＬ、５００～３０ ＩＵ／ｍＬ之间和＜３０ ＩＵ／ｍＬ 的样本分别为２５份、１７份和４５份，其ＨＣＶ Ａｇ浓度 ＞３．００ ｆＩｍｏｌ／Ｌ和抗一ＨＣＶ信号值／判断值≥１的阳 性率分别为９２．０％：９６．０％、５８．８％：８２．３％及 １１．１％：７５．６％；同时，血浆样本中ＨＣＶ ＲＮＡ载量 低于Ａｂｂｏｔｔ ＲｅａｌＴｉｍｅ ＨＣＶ Ｇｅｎｏｔｙｐｅ Ｉ１试剂盒ＬＯＤ 要求为５００ ＩＵ／ｍＬ时，有４７份样本未能分型，基因 分型检测率仅为２４．２％。在检出的２１７份ＨＣＶ ＲＮＡ阴性样本中，ＨＣＶ Ａｇ试剂及ＨＣＶ Ａｂ试剂分 别检出阳性样本７份和７１份。由于不同的检测原 理，试剂的敏感性和特异性均存在差异，这与文 献［９—１１］报道相符。血清学指标ＨＣＶＡｇ和ＨＣＶ． Ａｂ在不同ＨＣＶ ＲＮＡ载量的阳性率存在显著性差 异。另有国外资料报道 １２］，ＥＬＳＩＡ法检测核心抗原 比检测抗体缩短窗口期平均５８．２天，仅比ＲＴ．ＰＣＲ 检测ＨＣＶ ＲＮＡ多０．２３～３．３３天，而抗体出现则比 检测到ＨＣＶ ＲＮＡ晚２８—１４０天。临床上对确诊 ＨＣＶ感染有几种解释：当ＨＣＶ ＲＮＡ阳性及抗．ＨＣＶ 阴性时，则提示患有急性丙型肝炎，或多见于感染者 免疫功能低下及严重免疫抑制治疗的患者；当ＨＣＶ ＲＮＡ和抗－ＨＣＶ均阳性时，可确诊为急性丙型肝炎 研究适合筛查与早期Ｉ临床确诊联合检测ＨＣＶ感染 的实验室诊断技术。 参考文献 ［１］周一炎，尚桂芳，杨立新，等．ＨＣＶ核心抗原作为“窗口期” ＨＣＶ感染标志物的检测［Ｊ］．中国输血杂志，２００４，１７（３）：１６２— １６３． ［２］ 龙润乡，杨蓉，白慧珠，等．ＨＣＶ抗体阳性样品核酸及核心抗原 检测分析［Ｊ］．医学研究杂志，２０１０，３９（１２）：４１－４３． ［３］ 陈新月，窦晓光，Ｈｕ ＤＬ，等．丙型肝炎病毒核心抗原实验室检 测及其Ｉ临床意义［Ｊ］．中国病毒病杂志，２０１３，３（１）：１２．１６． ［４］苏迎盈，刘慧鑫，汪宁．中国丙型肝炎病毒基因型分布［Ｊ］．中 华流行病学杂，２０１３，３４（１）：８Ｏ．８４． ［５］ 中国疾病预防控制中心．丙型肝炎病毒实验室检测技术规范 （试行）［Ｓ］．２０１１．０９．ＸＸ ［６］ 李华，龙润乡，杨蓉，等．ＨＣＶ不同标志物检测结果比较分析 ［Ｊ］．医学研究杂志，２０１２，４１（６）：１７．２ｏ． ［７］ 何长辉．丙型肝炎病毒检测方法的应用评价［Ｊ］．临床和实验 医学杂志，２０１０，９（１０）：７５３．７５５． ［８］黄莲芬．不同方法测定对丙型肝炎诊断的影响分析［Ｊ］．１晦床 和实验医学杂志，２０１１，１０（４）：２８９．２８９． ［９］ 谷金莲，于洋，梁争论．ＨＣＶ Ａｇ或ＨＣＶ ＲＮＡ试剂用于筛查丙 型肝炎病毒感染样本的性能比较［Ｊ］．中国生物制品学杂志， ２０１４，２７（９）：１１８１—１１８４． ［１０］王燕，窦恒利，徐军．酶联法抗一ＨＣＶ和ＨＣＶ．ｃＡｇ联检对丙型 肝炎实验室诊断的应用价值［Ｊ］．放射免疫学杂志，２０１２，２５ （３）：２７９—２８１． ［１１］严海燕，欧阳颖，刘晓强，等．ＨＣＶ—ｃＡｇ、ＨＣＶ—ＲＮＡ及ＨＣＶ—Ａｂ 联合检测降低丙型肝炎的误诊率［Ｊ］．中国卫生检验杂志， ２０１２，２２（１０）：２４１２—２４１４． １ １２ｊ Ｌａｐｅｒｅｈｅ Ｓ，Ｌｅ Ｍａｒｒｅｅ Ｎ，Ｓｉｍｏｎ Ｎ，ｅｔ ａ１．Ａ ｎｅｗ ＨＣＶ Ｃｏｒｅ ａｌ１． ｔｉｇｅｎ ａｓｓａｙ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｄｉｓａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｍｍｕｎｅ ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ：ａｌｌ ａｌ— ｔｅｍａｔｉｖｅ ｔｏ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｉｏｌｏｇｙ ｉｎ ｔｈｅ ｄｉｄｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｅａｒｌｙ ＨＣＶ ｉｎｆｅｅ． ｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｎ，２００３，４３（７）：９５８—９６２． 收稿日期：２０１５—０５—１８修回日期：３０１５．０６．０９编辑：王祖森